乙型肝炎病毒特异性小干扰RNA对转基因小鼠毒副作用的评价

目的探讨基于载体的表达性小干扰RNA(siRNA)对乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠的毒副作用。方法 siRNA表达载体经微静脉注射转染HBV转基因小鼠,设立特异性siRNA组、PBS对照组、阴性质粒对照组及正常Balb/c小鼠对照组。在注射后5 d、12 d、19 d、26 d、33 d、2个月和3个月的不同时间,经其内眦静脉采血检测小鼠ALT水平变化。ELISA方法检测其血清干扰素-α(IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。W estern blot检测其肝脏组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、原癌基因(c-Fos)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,HE染色进行组织病理学观察。结果基于聚合酶Ⅲ(PolⅢ)的siRNA表达载体与基于聚合酶Ⅱ(PolⅡ)的siRNA表达载体相比,长期作用机体可使转基因小鼠血清ALT水平显著升高(P<0.05);ELISA分析发现IFN-α水平前者似乎高于后者,但差异无统计学意义(P>0.05)。在治疗26 d,直到治疗3个月,特异性siRNA治疗组与PBS对照组相比,TNF-α表达在PolⅢ组表达明显降低(P<0.05);而PolⅡ组TNF-α表达与PBS对照组比较差异无统计学意义。W estern blot结果表明肝组织Bcl-2、c-Fos表达显著增加,而Bax表达明显降低(P<0.05),且该组凋亡分析表明细胞凋亡被明显抑制。组织形态学可见肝细胞出现二倍体,核仁增大,核膜清晰可见。结论基于PolⅢ的siRNA表达载体与PolⅡ的siRNA表达载体相比对肝细胞有一定的毒副作用,凋亡被抑制,细胞增殖失控。过强表达的HBV特异性siRNA可影响机体的生物网络调控,导致增殖与凋亡的失衡。