柯萨奇-腺病毒受体不同胞内功能域缺失突变载体的构建与表达

目的以柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)蛋白结构的功能解析作为切入点,构建不同CAR胞内域缺失突变的表达载体。方法利用定点缺失突变策略构建CAR胞内域PKC、CK2、TYR磷酸化位点的缺失突变体及胞内域完全缺失的突变体。利用三步PCR法扩增获得相关的基因片段后,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/V5/His,通过双酶切及测序进行鉴定后,分别转染至低表达CAR的人卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,并用Werstern blot检测细胞转染后CAR的表达水平。结果所有突变体经过测序分析均证实序列与设想的突变序列相符,各突变体在SKOV3细胞中获得了满意的表达。结论成功构建不同CAR胞内功能域缺失突变表达载体,为后续研究CAR及其胞内不同功能域在卵巢癌中的作用机制提供了研究基础。