卵巢癌侧群细胞流式分选方法的建立及探讨

目的:探讨分选卵巢癌细胞株SKOV3中的侧群(side population,SP)细胞的荧光染料Hoechst33342的最佳染色浓度及SKOV3的最适细胞密度。方法:制备SKOV3细胞悬液,以荧光染料Hoechst33342和7-AAD染色,维拉帕米拮抗对照,选择不同浓度的Hoechst33342(2.5,3,4,5,6mg/L)孵育1×106个/mL SKOV3细胞90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例;选取不同细胞密度的SKOV3细胞悬液(6×105,7×105,8×105,9×105,1×106个/mL),3mg/L的Hoechst33342孵育90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例。结果:通过Hoechst33342蓝光和红光双参数图,SP细胞位于左下角两种荧光均很弱的区域。Hoechst33342浓度不变时,SP细胞比例随细胞密度的增加而升高;SKOV3细胞密度不变时,SP细胞比例及细胞活性随hoechst33342浓度升高而降低。卵巢癌SKOV3细胞株在细胞密度为8×105个/mL,加入终浓度为3mg/L的Hoechst33342,37℃水浴90min,为最佳染色条件,此时SP细胞比例为(1.12±0.104)%,且细胞保持良好的活性。结论:人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞,Hoechst33342浓度及SKOV3细胞密度是影响SP细胞比例及细胞活性的重要因素。