二重荧光定量RT-PCR检测胰腺癌患者CD44v6基因的表达

目的建立一种敏感、特异的二重TaqMan实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法,定量检测CD44v6基因在胰腺癌患者中的mRNA表达水平。方法设计目的基因CD44v6和内参基因β-actin的引物与探针并构建两者的重组质粒,通过优化反应条件,建立二重qRT-PCR方法的标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。应用该方法定量检测18例胰腺癌患者外周血单核细胞(PBMC)中CD44v6mRNA的表达水平。结果成功了构建该方法的标准曲线,其特异性较高,重复性良好,CD44v6和β-actin基因的检测下限均达到100copy/μL,是常规RT-PCR的10倍,7例胰腺癌患者百万PBMC中CD44v6表达量的对数值为3.4～3.9,另9例为3.9～4.9,仅2例在5.0以上。结论本研究建立的二重qRT-PCR方法可定量检测CD44v6基因的表达水平,并对试验个体及试验组的CD44v6表达水平进行比较,从而为胰腺癌的诊断、预后及治疗效果的评估提供了有效的手段。