多重荧光RT-PCR方法检测手足口肠道病毒方法的研究

目的为了解手足口病的流行和感染情况,并进行快速准确的检测。方法本研究建立了含非竞争性内标的同时检测肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型及柯萨奇病毒CA16型的四重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评价,并对多份临床样本进行了应用检测。结果实验结果表明,该检测方法特异性强,对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行了检测,显示了良好的特异性;该检测方法对EV71型和CA16型的检测灵敏度分别达到31.25 TCID50和1.25×102TCID50;将浓度为1×104TCID50及5×102TCID50的EV71样本进行重复性实验,其变异系数均小于1.5%;将浓度为5×102～5×105TCID50的EV71和CA16样本进行定量范围实验,其相关系数R2值在0.982～0.998之间。采用本研究建立的方法检测40份疑似临床样本,最后检出31份肠道病毒阳性样本,检出率为77.5%,其中8例为EV71型阳性,13例为CA16型阳性。另外,实验数据表明内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。结论本方法能同时快速检测所有肠道病毒并进行EV71型及CA16型的分型,并且灵敏度高、特异性好、扩增效率高,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。