HIV-1黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析

目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV21)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆,分别命名为CHNHLJ03009c34(Gen-Bank序列号为AY905493)和CHNHLJ03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现,与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1B′亚型分离株RL42,同源性为91.52%。系统发育分析结果表明,该株为泰国B′亚型,与云南分离株RL42的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RL42没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞,不能感染U87.CD4.CX2CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV21阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因,该病毒属于B′亚型(泰国亚型),为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。