金黄葡萄球菌肠毒素C3基因的克隆及原核表达

目的 克隆并原核表达金黄葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)基因.方法 以金黄葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增SEC3基因中编码成熟蛋白的基因片段,克隆至pET-32a(+)表达载体,构建重组表达质粒SEC3-pET-32a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 经PCR扩增获得720 bp的SEC3基因;重组表达质粒构建正确;表达产物的相对分子质量约为43 000,为可溶性表达;纯化的重组蛋白具有良好的反应原性.结论 已成功克隆并原核表达了SEC3基因,为单克隆抗体和诊断试剂的制备及SEC3抗毒素的研制提供了材料.