Notch1信号途径在食管鳞癌细胞中的激活及对细胞周期的影响

目的观察Notch1信号途径在食管鳞癌EC9706细胞中的激活状态及其对细胞周期的影响。方法通过免疫细胞化学检测Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706细胞中的表达,并通过免疫荧光方法研究Notch1基因在EC9706细胞中的激活状态。并且利用CCK-8试剂检测食管癌细胞的增殖状态。此外,采用RT-PCR和Western blot技术检测与细胞周期相关基因的表达,最后通过流式细胞仪进一步探索激活的Notch1信号途径对细胞周期的影响。结果转染pcNICD后的食管鳞癌细胞株中发现Notch1基因的表达。免疫荧光结果显示,转染pcNICD后的食管鳞癌细胞株中Notch1信号途径处于激活状态。与未处理和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细胞的生长速率明显受到抑制(P<0.01)。此外,与未处理的和转染pcD-NA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细胞的CDK2,cyclin D1和E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调(P<0.05)。转染pcNICD的EC9706细胞在G0/G1期的比率高达74.5%,而未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞在G0/G1期的比率分别为59.1%和59.0%。细胞周期分析显示瞬时表达NICD的EC9706细胞在G0/G1期比率的增加,提示激活的Notch1信号途径能够诱导细胞静止在G0/G1期。结论Notch1信号途径的激活引起食管鳞癌细胞的细胞周期静止,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。