乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A双突变复制质粒的构建

目的:构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基本核心启动子(base core promoter,BCP)区A1762T/G1764A双突变株的复制质粒。方法:以1.5拷贝HBV野生型全基因组序列质粒(pHBV1.5,C型)为模板,采用分子克隆、大引物PCR定点诱导突变和遗传检测法等技术,筛选出阳性克隆,提取突变质粒,经DNA测序鉴定质粒序列的正确性。将突变质粒转染到人肝癌HepG2.0细胞,测定细胞培养液HBV DNA载量和HBsAg水平来鉴定突变质粒的复制能力。结果:成功构建BCP区A1762T/G1764A双突变复制质粒,经转染人肝癌HepG2.0细胞培养后测定HBV DNA水平,双突变株复制能力高于野生株[分别为(3.29±1.27)×105拷贝/ml和(1.24±0.24)×105拷贝/ml,P=0.01]。结论:获得BCP区A1762T/G1764A双突变株质粒,为进一步研究启动子转录活性等基础性研究提供了基本模型。