人KIAA1199蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定
Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition)(2012)
摘要
目的 KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础。方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中。经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199。其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性。此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体。结果 pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KI-AA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础。
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关键词
GST fusion protein,KIAA1199,MBP fusion protein,Polyclonal antibody
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![](https://originalfileserver.aminer.cn/sys/aminer/pubs/mrt_preview.jpeg)
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