根癌农杆菌介导CYP1A1转化菠萝的研究

将菠萝(Ananas comosus)愈伤组织经含有植物表达重组质粒(pUHA1-CYP1A1)的根癌农杆菌(LBA4404菌株)侵染后,在MS+3.0 mg/L BA+2.0 mg/L NAA+100 μmol/L AS+8 g/L agar上共培养3 d,转入选择培养基(MS+3.0 mg/L BA+2.0 mg/L NAA+20 mg/L Km+400 mg/L Carb+8 g/L agar)上培养约10 d后开始分化出不定芽;28 d后将绿色的抗Km不定芽转入MS+2.0 mg/L NAA+30 mg/L Km+300 mg/L Carb+8 g/L agar上再进行连续2轮选择,随后将绿芽转入MS+1.0 mg/L IBA+30 mg/L Km+8 g/L agar上生根,共获得95株Km抗性植株,转化率0.12%~2.69%.对其中部分的抗Km植株进行PCR检测,PCR阳性植株率达64.29%.经Southern杂交进一步证实,CYP1A1已整合到菠萝基因中.以琼脂为培养基凝固剂、共培养基中添加AS、增加选择次数和逐渐增加新一轮选择培养基中的Km质量浓度等是根癌农杆菌介导菠萝愈伤组织获得转基因植株的重要条件.