PPARα靶向人miRNA的预测及鉴定

目的预测并鉴定PPARα靶向的人miRNA。方法通过生物信息学分析预测PPARα靶向的miRNA。PCR扩增PPARα的3'UTR,克隆至报告基因载体中,与候选miRNA共转染293T细胞,双荧光素酶活性分析确定候选miRNA与PPARα的结合位点。在293T细胞中瞬时转染候选miRNA类似体,提取总RNA及全蛋白,应用real time PCR和Western blot检测PPARαmRNA和蛋白的表达。结果 (1)TargetScan数据库预测到miR-9和miR-124能与PPARα的3'UTR区互补结合。(2)miR-9或miR-124均可降低pmirGLO-PPARα-3'UTR荧光素酶活性(P<0.01)。(3)在miR-9或miR-124过表达的293T细胞中,PPARαmRNA和蛋白表达均降低(P<0.01)。结论 PPARα是miR-9和miR-124共同的靶基因,miR-9或miR-124在转录水平负性调控PPARα的表达。