人外周血单个核细胞向心肌样细胞分化的研究

目的 通过体外直接培养人外周血单个核细胞(MNCs),并应用5-氮杂胞苷诱导其分化,探讨MNCs经过培养和诱导能否向心肌样细胞分化.方法 以Ficoll密度梯度离心法从人外周血中分离出MNCs,于含20%FBS的DMEM培养液中培养,第3天以10 μmol/L的5-氮杂胞苷诱导24h.第14天,对于所培养的贴壁细胞行肌球蛋白、α-肌节肌动蛋白、结蛋白和肌钙蛋白T的免疫细胞化学染色;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞是否表达α-MHC和β-MHC等基因;同时作CD34、AC133和α-肌节肌动蛋白的流式细胞计数分析(FACS).结果 培养第14天开始纺锤形贴壁细胞数量明显增多,并聚集成簇.免疫细胞化学染色法显示肌球蛋白、α-肌节肌动蛋白、结蛋白和肌钙蛋白T均呈阳性.RT-PCR结果显示经5-氮杂胞苷诱导分化后的MNCs存在α和β-MHC基因的表达.FACS显示,CD34阳性或AC133阳性率为(53.04±5.60)%、α-肌节肌动蛋白阳性率为(42.70±11.73)%.结论 体外培养并经5-氮杂胞苷诱导后的MNCs既具有心肌样细胞的部分特点,又具有干细胞的部分特征.在适当的条件下,MNCs有向心肌样细胞分化的潜能.