HPLC法同时测定大鼠血浆中茶多酚主要活性成分EGCG和ECG

目的:建立HPLC法同时测定大鼠血浆中茶多酚(tea polyphenols,TP)主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)的浓度,为TP药代动力学研究提供测定方法学。方法:采用RP-HPLC法,使用Kro-masil-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,预柱为Kromasil-C18保护柱(4.6mm×20mm,10μm),以乙腈-0.1%枸橼酸溶液(14:86)为流动相,流速1.5mL.min-1,检测波长280nm;血浆样品200μL加75μg.mL-1间苯二酚内标溶液10μL,乙酸乙酯400μL提取2次,N2流挥干后加10%乙腈水溶液100μL,漩混1min,4℃低温离心(7500r.min-1)10min后,取上清液60μL进样分析。结果:EGCG和ECG的保留时间分别为9.92min和29.51min,间苯二酚的保留时间为5.96min,三者之间达到基线分离,并不受空白血浆和代谢物以及茶多酚中其他成分的干扰。EGCG和ECG标准曲线的线性范围分别为0.5～300μg.mL-1(r=0.9999)和0.1～60μg.mL-1(r=0.9999);日内精密度RSD均小于5.7%,日间精密度RSD均小于11.2%;准确度为94.78%～110.6%;EGCG、ECG和内标的萃取回收率分别为85.73%～91.93%,79.08%～86.51%,91.88%～94.88%;血浆样品在-20℃保存下至少在21d内和室温保存下8h内稳定。大鼠ivTP100mg.kg-1后血浆样品应用上述方法测定血药浓度,表明TP药动学行为遵循二室模型一级动力学。结论:本文建立的大鼠血浆中TP主要活性成分EGCG和ECG的HPLC测定方法准确,专属性及重现性好,且快速简便,可用于TP注射液的非临床药代动力学研究。