多靶点复合抗原抗肿瘤基因疫苗的构建及真核表达

目的:构建含有人存活蛋白(survivin)-2B主要T细胞表位区域、人和猴绒毛膜促性腺激素β链的核心片段CTP37区域融合基因的真核表达质粒,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法:通过基因合成和搭桥PCR技术构建含有Survivin-2B主要T细胞表位区域、人和猴CTP37区域基因的融合基因2PAG,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中,继而又将酶切后的sig-2PAG-FC-GPI融合基因导入含有细小病毒内部核糖体结合位点(IRES)基因且可以共表达人GM-CSF和B7.1融合基因的真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;将构建的重组质粒pVAX1-sig-2PAG-FC-GPI-GM/B7(简称pVAX1-2PFcGB)转染293T细胞,利用流式细胞仪和免疫荧光检测其表达情况。结果:2PAG融合基因经测序正确,PCR和酶切鉴定证明已成功连入真核表达载体pVAX-IRES-GM/B7中;流式细胞仪和免疫荧光的检测结果显示,重组质粒pVAX1-2PFcGB在293T细胞中得到很好的表达。结论:成功构建了重组质粒pVAX1-2PFcGB,且在293T细胞中可以有效表达,为对该基因疫苗的后续功能研究奠定了基础。