脑心肌炎病毒蚀斑纯化及滴度测定方法的建立

目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)蚀斑纯化及滴度测定方法。方法将EMCV系列稀释后接种至单层Vero细胞,覆盖甲基纤维素,出斑后挑取蚀斑进行扩增,收获病毒液。选取5个EMCV原液样品感染Vero细胞进行蚀斑滴度测定,经结晶紫染色计数蚀斑,计算病毒滴度。重复测定5次,验证蚀斑法的精密性,并与微量细胞病变法进行比较。结果 EMCV感染Vero细胞后,约48 h出现边缘整齐直径为0.5～1.5 mm的蚀斑,经结晶紫染色后,可见清晰透明空斑,边缘清晰。5个EMCV原液样品经蚀斑法测得的病毒滴度在3.16×106～1×107PFU/ml之间,变异系数为0.88%～2.07%;经微量细胞病变法测得的病毒滴度均大于3.16×107PFU/ml,变异系数为1.63%～2.90%,表明蚀斑法精密性更好;两种方法经直线回归分析,具有线性相关性(r=0.810,P=0.097)。结论建立了简便直观的EMCV蚀斑纯化方法及精密性良好的蚀斑滴度测定方法,为EMCV的生物学特性及疫苗研究奠定了基础。