绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养和鉴定

目的:为了追踪评价干细胞修复组织缺损时干细胞龛的分子作用机制,培养绿色荧光蛋白转基因小鼠的骨髓间充质干细胞,并对其进行鉴定和诱导分化。方法:取3-4周龄gfp小鼠股骨全骨髓,ACK裂解红细胞后采用贴壁法进行体外培养和传代,荧光显微镜下观察贴壁细胞荧光状态。运用流式细胞术检测干细胞标记物,通过体外诱导观察其成骨成脂能力。结果:原代培养的Gfp骨髓间充质干细胞,能多次传代,细胞的荧光仍保持原有状态,未发生淬灭。流式细胞术鉴定CD29、CD90表达阳性,CD45表达阴性。成骨诱导3周后骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,茜素红S染色有橘红色磷酸盐胞外基质沉积并保持原有的荧光强度;成脂诱导2周后,细胞形态增大,油红O染色可见胞质内大量橙红色脂肪空泡,分化的细胞仍保持原有的荧光强度。结论:贴壁培养的Gfp骨髓间充质干细胞不仅荧光表达稳定,而且具有干细胞自我更新增殖和多向分化的干细胞特性,可以做为研究干细胞龛的优质示踪干细胞源。