L-型钙通道α1C基因片断在大肠杆菌中的谷胱甘肽巯基转移酶融合表达

目的 构建小鼠L-型钙通道CaV1.2α1亚基(α1C)C末端的原核重组载体并进行表达和鉴定.方法 根据小鼠α1C基因序列设计合成特异性引物,PCR扩增出其C末端(1808-2139)基因,插入谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-KG中,在大肠杆菌BL21中诱导GST融合蛋白的表达.结果 构建的重组质粒经酶切后可见约1 000bp、5 000 bp大小的片段,与预期结果一致,测序结果表明序列正确.在异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组菌表达出一个分子量约为70 ku的表达产物,Western blot结果证实重组GST融合蛋白可与针对α1C亚基C末端的抗体发生特异性的反应.结论 小鼠α1C亚基的C末端编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-KG中,并在大肠杆菌BL21中获得表达,为进一步纯化和研究相互作用蛋白奠定了基础.