高原鼠兔低氧诱导因子-2α基因的克隆

目的克隆高原鼠兔(Ochotona curzoniae)低氧诱导因子-2α(Hypoxia inducible fac-tor-2,HIF-2α)基因的cDNA部分片段,以获得HIF-2αcDNA的全长序列和进行HIF-2α的表达研究。方法从高原鼠兔肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出HIF-2α基因的cD-NA部分片段,与pGEM-T Easy载体连接,转化入感受态细胞JM109后,挑取阳性克隆,提取重组质粒,经酶切鉴定后进行序列测定。结果酶切分析和DNA序列分析表明,克隆所得片段大小为517bp,与预期一致。核苷酸序列和推测的氨基酸序列相似性比较显示,该片段与人、原牛、野猪、小鼠、褐家鼠HIF-2α核苷酸序列的同源性分别为90%、89%、88%、88%、86%;氨基酸序列与人、原牛、野猪、小鼠、褐家鼠HIF-2α氨基酸序列的同源性分别为98.2%、97.9%、98.1%、96.9%、96.4%。结论本实验首次成功获得高原鼠兔HIF-2α基因的cDNA部分片段,为进一步揭示高原鼠兔的低氧适应机制提供了事实依据。