幽门螺杆菌CagⅤ蛋白的克隆表达及初步分析

目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)Ⅳ型分泌系统cagⅤ(hp0530)基因的原核表达系统,表达并纯化CagⅤ蛋白,初步分析其结构和抗原性,为进一步研究幽门螺杆菌的致病机制和治疗药物的筛选奠定基础.方法 以H.pylori ATCC700392株基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增获得目的片段,将其插入表达载体pET28a后转化大肠杆菌BL21(DE3),表达纯化后利用蛋白质印迹(Western blot)分析CagⅤ蛋白的抗原性.结果 双酶切鉴定结果证实cagⅤ基因重组表达载体构建成功；重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为幽门螺杆菌CagⅤ蛋白；Western blot检测结果显示CagⅤ蛋白具有特异抗原性.结论 所克隆表达的CagⅤ蛋白具有较好的抗原性,对后续的的H.pylori致病性和检测、分析研究有比较重要的意义.