慢病毒载体介导的neprilysin基因对小鼠神经干细胞的转导及表达

目的 观察慢病毒载体(lentiviral vector)介导的脑啡肽酶(Lenti-脑啡肽酶)基因对小鼠神经干细胞(NSC)转导及其表达的情况.方法 利用Lenti-脑啡肽酶基因载体体外转导小鼠原代NSC,细胞免疫荧光染色和蛋白质印迹法分析NSC的蛋白表达,酶联免疫吸附试验和高效液相色谱法检测NSC中脑啡肽酶蛋白对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)的体外降解效率,不同组别之间差异比较采用t检验.结果 Lenti-绿色荧光蛋白转导NSC后96 h的成功转导率达90％以上.NSC转导脑啡肽酶基因后可同时表达脑啡肽酶和NSC的标记抗体Nestin或神经元的标记抗体微管相关蛋白2.随着细胞脑啡肽酶膜蛋白的浓度增加或孵育时间延长,脑啡肽酶降解Aβ1-40活性也增强.2.5μg(21.00±2.51)及1.0 μg (15.00±0.54)脑啡肽酶蛋白降解活性较0.5 μg(8.00±0.81)显著提高(t=40.4、12.7,均P＜0.01),phosphoramidon则明显抑制脑啡肽酶活性(0.5 μg:0.08±0.01;1.0μg:0.04±0.01；2.5 μg:0.05 ±0.01,与相等脑啡肽酶浓度比较,t=17.2、51.3和14.1,均P＜0.01).孵育1、4和12h的脑啡肽酶降解率分别为11.4％、28.4％和93.7％.结论 Lenti-脑啡肽酶基因可于体外成功转导小鼠NSC,移植脑啡肽酶基因转染的NSC具有潜在的治疗前景.