甲基化特异性PCR在原发性肝细胞癌p16INK4A基因甲基化检测中的应用

目的设计一种将亚硫酸氢化测序PCR和甲基化特异性PCR相结合的巢式PCR技术,即BSMSP技术,对原发性肝细胞癌手术切除组织中p16INK4A甲基化情况进行检测。方法基因组DNA经亚硫酸氢化修饰后,首先通过亚硫酸氢化测序PCR评估模板的质量,然后再分别用甲基化和非甲基化特性PCR分析基因的甲基化状态,并将所得的扩增产物进行测序验证。结果在40例HBV感染的肝细胞癌中,有3例(7.5%)因模板质量原因无法检测,其余37例标本中p16INK4A基因甲基化发生率为78%,测序结果证实了所用方法的可行性。结论BSMSP技术对于肿瘤发生过程中基因甲基化的研究,以及临床诊断方面都具有一定的应用价值。