两种外周血单个核细胞采集方法体外诱导CIK细胞的比较

目的比较两种外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)采集方法诱导的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)扩增效率、细胞表型、杀伤肿瘤细胞的活性及其回输至肿瘤患者体内的免疫调节作用.方法 12例肿瘤患者共进行36次CIK细胞体外诱导、扩增,其中6例患者共18次扩增采用血细胞分离机采集PBMCs,另外6例患者共18次培养采用Ficoll密度梯度分离50 mL外周血方法采集PBMCs.结果采用血细胞分离机或Ficoll分离法采集PBMCs经体外诱导获得CIK(分别为A-CIK和F-CIK)细胞数分别为7.47×109(3.7-13.6×10)9和6.37×109(3.8-11.8×10)9.培养至14 d时,>90%的A-CIK和F-CIK细胞表型为CD3+,其中CD3+CD56+,NKG2D+细胞及细胞内TH1细胞因子均显著升高.效靶比为60:1时,A-CIK和F-CIK细胞对Daudi、K562及293的杀伤活性分别为(49.1±17.8)%和(55.3±11.5)%、(67.6±24.1)%和(58.1±17.6)%、(36.4±11)%和(33.7±14.8)%.给肿瘤患者回输自体A-CIK或F-CIK细胞14 d后,外周血中CD3+、CD8+及CD3+、CD56+细胞以及PBMCs内IFN-γ均显著升高.结论采集肿瘤患者50 mL外周血分离的PBMCs足以制备临床治疗使用的CIK细胞.