人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的鉴定及相关胞内信号转导通路的研究

目的:鉴定人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的类型及其介导的细胞内信号转导途径,探讨EP3对人肝细胞癌发生发展的影响及相关分子机制。方法:用RT-PCR实验检测Huh7细胞中EP3亚型的类型,给予EP3受体激动剂sul-prostone处理后,用WST-8法检测细胞的增殖活性,用酶联免疫法测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度的变化,用Western blot-ting法检测Akt、Erk等蛋白磷酸化水平的变化。结果:RT-PCR结果显示人肝细胞癌Huh7细胞中表达的EP3剪接体类型是EP3(5);WST-8实验结果显示,经10.0μmol/LEP3受体激动剂sulprostone作用24h后,细胞增殖率增加46.2%;酶联免疫法显示sulprostone可促使细胞内cAMP浓度显著增高;Western blotting实验显示,sulprostone作用30min可使Huh7细胞中Akt蛋白磷酸化水平增加27%,而Erk蛋白磷酸化水平降低16.4%。结论:人肝细胞癌Huh7细胞中,表达的EP3亚型类型是EP3(5),EP3受体激动剂sulprostone可以促进Huh7细胞的增殖,通过EP3受体的介导促进胞内cAMP表达水平的增加,其机制可能部分涉及到Akt及Erk信号转导通路。