Résistance du cytomégalovirus au ganciclovir associée à une mutation du gène UL97

Le but de notre étude était d'évaluer le rôle en pathologie de souches de cytomégalovirus portant des mutations dans la région du gène UL97 codant pour le sous domaine IX de la phosphotransférase UL97. Parmi 8 isolats, provenant de 4 patients présentant un échec clinique du traitement par le ganciclovir (GCV) (3 malades atteints de SIDA, D. C. M. et un patient ayant subi une allogreffe de moelle, J.), 4 ont été trouvés résistants in vitro au GCV (D2, D3 du malade D. J2 du patient J. et C4 du malade C). La séquence codant pour la région IX a été analysée à partir des isolats et, pour les malades C. et M. atteints d'encéphalite, directement à partir du liquide céphalorachidien (LCR). Les produits d'amplification par PCR de la séquence d'intérêt ont été hybridés avec une sonde DL recouvrant une séquence de 17 paires de bases codant pour un site présumé de reconnaissance du substrat. L'absence d'hybridation pour les souches D2, D3, C4 et le LCR du malade C. suggérait la présence de mutations dans cette région. Le séquençage direct des produits de PCR par une technique non radioactive utilisant une révélation par coloration au nitrate d'argent a confirmé les résultats de l'hybridation en mettant en évidence des mutations responsables de substitutions d'acides aminés : Cys = > Gly en position 592 pour D2 et D3, Ala = > Val en position 594 pour C4 et le LCR de C. Dans notre étude, les mutations dans le site catalytique de la phosphotransférase UL97 étaient associées à une résistance in vitro et in vivo au GCV. Le dépistage rapide de mutations par hybridation à l'aide d'une sonde spécifique a permis d'orienter le choix de la région à séquencer. Les deux méthodes sont directement applicables à des échantillons cliniques tels que le LCR et, lorsqu'une souche mutante responsable de la symptomatologie neurologique est identifiée, peuvent permettre d'orienter la thérapeutique.