siRNA沉默小鼠原代成骨细胞LIMK2基因的实验研究

目的探讨采用RNA干扰抑制原代成骨细胞中LIMK2的表达及其抑制效率,为进一步研究LIMK2基因的作用奠定基础。方法针对小鼠LIMK2基因,化学合成3条siRNA,分别编号为R1、R2、R3,用脂质体分别介导转染到小鼠原代成骨细胞中,转染后24、48h提取细胞的总RNA和总蛋白,分别进行RT-PCR和Western blot检测,研究3条siRNA在不同时间点对LIMK2基因的抑制效率。结果RT-PCR结果显示编号为R3的siRNA对LIMK2mRNA表达的抑制效率最高,两组应用R3siRNA后的LIMK2 mRNA表达量分别为对照组的19.30%(转染后24h)、18.63%(转染后48h);Westernblot检测显示编码为R3的siRNA对LIMK2蛋白表达的抑制效果最明显,两组应用R3siRNA的LIMK2蛋白表达量分别仅为空白对照组的1.32%(转染后24h)、1.19%(转染后48h)。结论编号为R3的siRNA可以很好地抑制小鼠原代成骨细胞的LIMK2表达。