MiR-218慢病毒表达载体的构建及鉴定

Xiao-lei SHI,Feng-rong HU,Si-jun HU,Wei-zhong WANG

Science Technology and Engineering（2011）

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摘要

构建人mir-218-2,pre-miRNA慢病毒表达载体,为研究miR-218在人体的功能及作用机制打下基础.以人hsa-mir-218-2前体序列,设计部分互补的正反向引物,进行引物退火,形成引物二聚体.PCR扩增引物二聚体,酶切后插入到线性化pGCSIL-GFP慢病毒表达载体中,对重组质粒进行双酶切鉴定,并进行慢病毒的包装与滴度检测.用构建好的慢病毒表达载体感染人胃癌细胞MKN-28,qPCR检测细胞内miR-218表达.结果显示,重组质粒经双酶切分析及转化菌液测序,插入序列正确,慢病毒表达载体感染人胃癌细胞后qPCR检测显示能显著增高miR-218的表达.说明本实验成功构建了hsa-mir-218-2慢病毒表达载体,感染人胃癌细胞后能有效提高miR-218的表达.为进一步研究miR-218在人体的功能及作用机制建立了实验基础.

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关键词

microRNA miR-218 Lentiviral vector

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