人源抗菌肽LL-37及其改良体串联体的原核表达及纯化

目的克隆人源抗菌肽(Antimicrobial peptide,AMP)LL-37及其改良体串联体基因,原核表达并纯化重组蛋白。方法利用生物信息学手段,对人源抗菌肽LL-37基因序列进行改良设计,合成人源抗菌肽LL-37及其改良体基因片段,经重叠延伸PCR获得人源抗菌肽LL-37及其改良体串联体基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-dLL-37,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,Tricine SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式,镍金属螯合亲和层析纯化重组蛋白。结果改良后的人源抗菌肽LL-37的等电点、稳定性及其在大肠杆菌中的半衰期均显著提高;重组表达质粒pET-28a-dLL-37经测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为11 000,主要以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度为0.473 mg/ml。结论已成功在大肠杆菌中表达并纯化了人源抗菌肽LL-37及其改良体串联体,为其后续生物学活性的研究奠定了基础。