特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究

目的 筛选针对HPV16 E7基因有效的siRNA,探讨其对HaCaT-E7细胞中HPVl6 E7 mRNA及细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达的影响.方法采用化学法合成3条HPV16 E7特异性siRNA,应用转染试剂Lipofectamine2000将其转染入HaCaT-E7细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HPV16 E7 mRNA的表达,采用流式细胞术(FCM)检测细胞表面HLA-Ⅰ类分子的表达.结果 3条siRNA均能有效抑制HaCaT-E7细胞中H/N16 E7的转录表达,以siR-NA2作用效果最明显,抑制率达75%,细胞膜表面HLA-Ⅰ类分子的表达明显上调,平均荧光强度(MFI)为130.18±1.07,高于空转染对照组(100.32±3.01)和非特异性siRNA对照组(100.82±2.87).结论化学合成的HPV16 E7特异性siRNA能有效抑制HaCaT-E7细胞中E7 mRNA的表达,同时使细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达上调.