携带人livin a基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livin α的重组腺病毒载体(rAd-livin α),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础.方法:以质粒pIRES2-EGFP-livin α为模板,通过PCR扩增出人livin α基因cDNA序列,再将livin α基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livin α.将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livin α与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livin α.用重组腺病毒rAd-livin α感染人DCs后,Western blot方法分析livin α蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化.结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livin α绿色荧光蛋白的表达.rAd-livin α 经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段.rAd-livin α感染的DCs中可检测到livin α蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05).结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livin α,使livin α蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高.