荧光素酶标记的肺癌细胞系的建立及动物模型验证

目的建立一株稳定表达萤火虫荧光素酶的人肺癌细胞系并通过裸鼠成瘤模型进行验证。方法酶切并连接萤火虫荧光素酶基因到真核表达载体pRc/CMV2上构建pRc/CMV2-luc重组质粒,脂质体2000转染到肺癌细胞株A549,经G418筛选得到抗性克隆,荧光素酶活性检测筛选出荧光素酶活性最高的稳定细胞克隆。小动物活体影像系统检测确定稳定细胞克隆生物发光能力和细胞数量的关系,建立裸鼠皮下成瘤模型并分析移植瘤的发光强度和肿瘤生长的相关性。结果重组质粒pRc/CMV2-luc转染A549细胞后,经G418筛选的抗性克隆传代至40代时,确定3株荧光素酶活性较高的阳性克隆,最高的9号克隆,1×105个细胞的RLU值为9.44×105。小动物活体影像系统检测发现阳性克隆的发光强度与细胞数量呈正相关(R2=0.99);9号克隆皮下接种裸鼠形成接种瘤,其发光强度与肿瘤的生长正相关。结论成功构建了稳定表达萤火虫荧光素酶的A549细胞系,该细胞系可在小鼠活体水平动态监测其发生、发展。