γ射线诱导IEC-6细胞GSK-3β信号转导途径的激活

目的 观察60Co γ射线对IEC-6肠上皮细胞糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号转导途径的激活效应.方法 培养的IEC-6细胞接受6 Gy 60Co γ射线照射后,分别在照射后5、30、60和120min进行各项实验.应用RT-PCR法检测GSK-3 β、Akt、caspase-9和caspase-3 mRNA表达变化,Western blot检测GSK-3β和Akt蛋白磷酸化的变化,分光法检测caspase-9酶活性.结果 6 Gy γ射线照射后30 min GSK-3β mRNA表达开始增高,60、120 min GSK-3 β mRNA均明显高于对照组;照射后30 min GSK-3 β蛋白磷酸化水平开始降低,60、120 min GSK-3 β蛋白磷酸化水平明显低于对照组水平;AktmRNA在γ射线照射后与对照组相比无明显改变;蛋白磷酸化水平在照射后30 min开始降低,60和120 min均明显低于对照组;caspase-9 mRNA在照射后30 min开始增高,60和120 min均高于对照组,caspase-9酶活性变化趋势与mRNA一致,在照射后30 min开始增高,并在辐射后60和120 min逐渐升高;caspase-3 mRNA在照射后60和120 min高于对照组.结论 6 Gy γ射线照射可以使GSK-3β上游的信号分子Akt磷酸化抑制,活性降低,进一步使GSK-3β在γ射线照射后磷酸化水平降低,被活化,从而激活GSK-3β信号转导途径,激活后的GSK-3β可激活其下游介导的与细胞凋亡相关的蛋白激酶家族的成员caspase-9、-3,从而造成IEC-6细胞的损伤.