胞质分裂阻滞微核法研究ATM基因辐射防护功能

[目的]研究ATM基因对毛细血管扩张性共济失调症(AT)患者皮肤成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)高辐射敏感性的纠正情况,以评价ATM基因的辐射防护功能。[方法]利用电穿孔技术,将含有ATM基因cDNA的真核表达载体PEBS7-YZ5转染到AT细胞,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATM cDNA的转录,Western blot验证ATM蛋白的表达;用胞质分裂阻滞微核法(CBMN),在PEBS7-YZ5-AT细胞、PEBS7-AT细胞和未转染AT细胞经60COγ射线0、1、2、3、4Gy照射后,观察比较三者间微核率及微核细胞率的差异。[结果]PEBS7-YZ5成功转进AT细胞,RT-PCR检测到ATM cDNA片段,Westernblot检测到ATM蛋白的表达。在0、1、2、3、4Gy剂量下,PEBS7-YZ5-AT细胞微核率及微核细胞率明显低于PEBS7-AT细胞和AT细胞,其差异具有显著统计学意义(P<0.01);而PEBS7-AT细胞和AT细胞间无明显差异(P>0.05)。[结论]AT细胞高辐射敏感性被ATM基因纠正,ATM基因具有辐射防护功能,含有ATM基因的真核表达载体PEBS7-YZ5有望成为辐射防护剂。