HPV16E6基因原核表达载体的构建及表达

构建HPV16E6基因原核表达载体并进行表达。根据GenBank中的人乳头瘤病毒(HPV)序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出321 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16E6已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16E6质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果在大肠杆菌中获得HPV16E6基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为38 kD;以IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h后融合蛋白产量最高。表达的蛋白能与抗HPV16E6抗体发生特异性反应。HPV16E6基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16E6疫苗的研制奠定了基础。