脱细胞处理对小肠黏膜下层细胞残留及生长因子含量影响的实验研究

目的探讨机械-酶消化法对小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)细胞残留量及生长因子含量的影响。方法取4h内市售新鲜猪空肠,采用机械处理(去除浆膜层、黏膜层及肌层)、脱脂、胰蛋白酶消化、去垢剂处理及冻干5个步骤制备SIS。每步操作后留取样品(n=4),分别作为A、B、C、D、E组;以新鲜猪空肠作为对照(n=4,F组)。HE染色及扫描电镜观察组织学变化;采用Nest-PCR技术测定死亡相关蛋白12(death associated protein12,DAP12)含量;ELISA法检测VEGF、bFGF、TGF-β和TNF-α的含量。结果组织学及扫描电镜观察显示A、B组有细胞残留,C、D、E组未见细胞残留。Nest-PCR检测示各组均含有DAP12;A～F组DAP12拷贝数分别为(18.01±9.53)、(11.87±2.35)、(0.59±0.27)、(0.29±0.05)、(0.19±0.04)、(183.50±120.13)copy×106/cm2。F组DAP12含量显著高于A～E组(P<0.05),A、B组高于C、D、E组(P<0.05),C、D、E组间比较差异有统计学意义(P<0.05),A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA法检测示A组VEGF、bFGF、TGF-β及TNF-α含量均显著高于其他各组(P<0.05);B、C、D、E组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单纯采用机械法制备SIS有较多细胞残留;机械-酶消化法能有效去除细胞,显著降低DAP12含量,生长因子含量无明显改变。