青花菜与白菜间体细胞杂种获得与遗传特性鉴定

为获得芸薹属白菜Brassica campestris与青花菜Brassica oleracea var.botrytis的种间体细胞杂交体,以青花菜和白菜的子叶与下胚轴为材料,分离制备原生质体,用40％聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)进行原生质体融合.融合细胞在以0.3 mol/L蔗糖、0.3 mol/L葡萄糖为渗透稳定剂,附加0.2 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.1 mg/L 1-萘乙酸(NAA) +0.1 mg/L激动素(Kinetin,Kin)的改良K8p培养基中液体浅层培养.将包埋于0.1％琼脂糖的8～10个细胞期的细胞在添加0.3 mol/L蔗糖和2 mg/L 6-BA+2 mg/L玉米素(Zeatin,ZEA) +1 mg/L NAA+0.5 mg/LKin的Kao培养基中诱导愈伤组织.愈伤组织转到MS+5 mg/L ZEA+2 mg/L IAA诱导不定芽.将长1～2 cm的不定芽转到1/2 MS+0.2 mg/L NAA诱导生根.将生根的植株转移到花盆,并对其杂种性质进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定.结果表明,融合细胞培养2-7d后发生第1次分裂,培养35 d后植板率为0.66％,不定芽再生率达3.7％.形态学观察显示,绝大多数再生植株的叶面积较大,株型和叶型为两种杂交亲本的中间型.染色体计数结果显示,再生植株染色体数目为2n=38.流式细胞仪测定DNA含量显示,再生植株DNA含量是亲本之和.随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)和基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization,GISH)分析结果证明再生植株具有双亲基因组.体细胞杂种花粉育性比较低,杂交、回交后其育性逐渐获得恢复.