EGF在毕赤酵母中的表达及活性测定

目的高效表达和纯化有活性的EGF蛋白。方法将含有表皮生长因子(EGF)基因的质粒pAO815通过LiAc法转入毕赤酵母细胞中,筛选在MM平板上生长缓慢的Muts型酵母工程菌,甲醇诱导基因表达产生EGF,柱纯化后利用SDS-PAGE检测到EGF的生成,MTT法及新生小鼠皮下法分别检测活性。结果 SDS-PAGE电泳检测EGF成功表达和纯化,MTT法测定EGF生物活性约为2.8×106IU/mL。结论本研究构建的工程菌株能高效表达EGF,且纯化的EGF具有与天然EGF同样的体外和体内活性。