结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用

目的克隆并构建结核分枝杆菌CysA2基因原核表达系统,建立基于rCysA2的ELISA并检测rCysA2-ELISA在肺结核患者血清学诊断中的敏感性和特异性。方法采用PCR扩增CysA2基因,构建CysA2基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rCysA2表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCysA2,免疫印迹鉴定rCysA2的免疫反应性。以rCysA2为包被抗原,建立rCysA2-ELISA并用于检测132例血清抗体,其中涂片阳性和阴性肺结核患者血清分别占96例和36例,非肺结核肺部疾病病人血清抗体30例,健康对照血清50例。结果克隆的CysA2基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rCysA2表达量为细菌总蛋白的25.4%。提纯的rCysA2在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rCysA2-ELISA检测涂片阳性和涂片阴性的肺结核患者血清抗体检出率分别为63.5%和61.1%,50例健康对照全部阴性、30例非肺结核肺部疾病患者1例呈现阳性,此方法的灵敏度为62.9%(83/132),特异性为98.8%(79/80)。结论本研究成功地克隆并构建了结核分枝杆菌CysA2基因及其原核表达系统。以rCysA2为包被抗原的rCysA2-ELISA方法有较高的灵敏度和很好的特异性,能有效检测涂片阴性患者血清抗体,rCysA2有望成为结核病血清诊断的有效候选抗原之一。