核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

目的克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因。方法人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性。结果人工合成的354 bpDNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因。将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物。SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符。在非变性条件下纯化目的蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当。结论成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因。