RNA干扰HIF-1α对血管生成拟态相关基因表达的影响

目的:探讨常氧及缺氧培养条件下RNA干扰沉默人食管鳞癌细胞Eca-109缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对血管生成拟态相关基因表达的影响.方法:选择未转染处理的食管鳞癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1αSiRNA的Eca-109细胞,分别予以常氧和缺氧培养,缺氧培养12、24、36、48、60、72、96h,采用Western blot法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α蛋白及mRNA表达,同时Western blot法检测上皮细胞激酶(EphA2)、血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、层粘连蛋白5γ2链(LN-5γ2)等血管生成拟态相关基因的表达.结果:缺氧条件下培养Eca-109细胞HIF-1α蛋白表达较常氧时增高,以24-48h为明显,72-96h开始减弱,而HIF-1α mRNA检测差异无统计学意义(F=0.70,P=0.67);RNA干扰后细胞在常氧下HIF-1α、EphA2、LN-5γ2蛋白几乎无表达,缺氧后亦无增强现象,VE-cadherin、MMP-2蛋白表达较未干扰细胞稍有减弱,缺氧后表达稍增强,但差异无显著性(均P>0.05).结论:RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达,HIF-1α基因沉默后可以不同程度减少EphA2、LN-5γ2等血管生成拟态相关基因的表达.