人干燥综合征B抗原重组体的构建及融合表达

目的 克隆人干燥综合征B抗原基因(human sjogren's syndrome antigen B, SSB)并进行原核表达,为使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础.方法 根据GenBank中检索到的人SSB cDNA序列,在5'非编码区和3'非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,逆转录RT-PCR扩增人干燥综合征B抗原cDNA.PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠埃希菌DH5a,构建重组质粒PET-30a-SSB.对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序.重组质粒导入大肠埃希菌BL21,阳性克隆经鉴定后在IPTG诱导下表达.结果 RT-PCR扩增产物为1245bp.重组质粒PET-30a-SSB经EcoR I和HindⅢ双酶切证实含目的基因片段.序列分析提示与GenBank中检索到的一致.SDS-PAGE和Western印迹结果显示融合蛋白相对分子量为73ku,具有天然SSB抗原活性.结论 成功克隆SSB基因并表达融合蛋白.