酵母双杂交筛选TEB4相互作用蛋白

目的 酵母双杂交筛选与TEB4(MARCH-VI)有相互作用的蛋白,构建该蛋白基因序列的重组栽体.方法 以人TEB4为诱饵质粒,利用酵母双杂交技术筛选人淋巴瘤cDNA文库.在SD/-4培养基上共获得150多个阳性克隆,将酵母菌扩增后抽提质粒,转化大肠杆菌,进行序列分析,并经过回复杂交验证,发现了一个与TEB4相互作用的蛋白:ATP synthase F0 subunit 6(ATP-C6).PCR法扩增ATP-C6,亚克隆到质粒pCMV-HA中,获得重组质粒pCMV-HA-ATP-C6,酶切和测序进行鉴定.结果 从人淋巴瘤cDNA文库筛选到一个与TEB4有相互作用的蛋白ATP-C6,并成功构建重组质粒pCMV-HA-ATP-C6. 结论应用酵母双杂交系统从人淋巴瘤cDNA文库中筛选并初步验证了与TEB4有相互作用的蛋白,为TEB4蛋白功能的进一步研究奠定了基础.