禽呼肠孤病毒P17蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其ELISA检测方法的建立

Veterinary Science in China（2007）

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摘要

用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒(ARV)P17非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV S1133株进行了RT-PCR扩增.扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞.经0.2 mmol/L IPTG诱导,表达的融合蛋白分子质量为42.4 ku,占菌体总蛋白的34%.表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后,纯度达到85%.Western-blotting显示,纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应,说明其具有抗原性.以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA.

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关键词

nonstructural protein P17,ELISA,prokaryotic expression,avian reovirus

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