肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LexA蛋白的表达、纯化及鉴定

目的对EHEC O157∶H7 LexA进行表达、纯化,并检测其免疫活性。方法lexA基因片段插入表达载体pET22b(+),在E.coliBL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8 mol/L尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第一步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定LexA蛋白的浓度,将纯化的LexA蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗lexA血清,采用免疫双扩、ELISA及Western blot分析LexA的免疫活性。结果lexA以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析两步组合纯化目的蛋白,经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98%,表达及纯化的lexA具有良好的免疫活性。结论在E.coliBL21(DE3)中表达的LexA蛋白具有良好的免疫活性。