蛋白激酶C α激活参与肿瘤坏死因子α引起的肝肾综合征肾小球滤过率下降

目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞蛋白激酶Cα(PKC-α)活性的影响,揭示TNF-α引起肝肾综合征肾小球滤过率(GFR)下降的机制.方法 选择大鼠系膜细胞株进行体外培养.按TNF-α处理的不同时间点(0、4、8、24h)分4组.分别应用Western blot、免疫荧光、免疫电镜及PKC-α活性定量检测方法,观察TNF-α对PKC-α表达量及活性的影响.结果 TNF-α处理组PKC-α蛋白表达与对照组比较无统计学差异(4h:0.75±0.13； 8h:0.76±0.12；24h:0.78±0.10,vs0h:0.84±0.11,P＞0.05).免疫荧光及免疫电镜发现:对照组PKC-α在胞质中呈弥漫性分布,核内无表达.TNF-α处理8、24h组PKC-α存在明显核周聚集,胞核内也可见少量PKC-α表达,以TNF-α处理8时最明显.PKC活性定量检测TNF-α处理8、24h组PKC-α活性明显增强(4h:1.11±0.96,P=0.612；8h:1.87±0.25,P=0.000；24h:1.68±0.14,P=0.000 vs 0h:1.07±0.06),以TNF-α处理8h组最明显(P =0.017 vs 24h).结论 TNF-α对GMCs中的PKC-α蛋白表达量无影响,却能明显增加其PKC-α活性,后者可能是TNF-α引起GFR下降的重要信号.