十二指肠钩虫热休克蛋白HSP60基因的克隆及重组表达

目的克隆十二指肠钩虫（Ancylostoma duodenale）热休克蛋白60（heat shock protein 60,HSP60）基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduHSP60蛋白。方法以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,PCR扩增AduHSP60基因。将获得的目的基因编码序列连接至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduHSP60。重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达、Ni-NTA亲和层析分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达及纯化情况。结果成功扩增到AduHSP60全长编码序列,编码序列长度为1 701bp,编码566个氨基酸。构建了重组表达质粒pETHF/AduHSP60,经诱导表达、分离纯化获得了分子质量单位为60ku的可溶性重组AduHSP60蛋白。结论本研究从十二指肠钩虫中分离获得了HSP60基因,构建的pETHF/AduHSP60重组质粒能在大肠埃希菌中表达重组蛋白,为进一步研究AduHSP60的生物学功能奠定了基础。