实时荧光定量聚合酶链反应检测血清2型猪链球菌的研究

目的基于TaqMan-MGB探针实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术,建立针对血清2型猪链球菌的快速检测方法。方法针对血清2型猪链球菌的csp2 J基因序列,应用Beacon Designer 7.0,设计了引物和TaqMan-MGB探针,建立Real-time PCR检测方法;把目的片段克隆到pMD18-T载体制作标准曲线;以常见致病菌及条件致病菌验证引物探针的特异性;制备血液模拟标本评价本方法在临床标本中的应用。结果由标准曲线可知该方法可以检测到100拷贝/反应体系的目的基因,特异性检测显示只有血清2型猪链球菌有荧光信号,其他常见致病菌及条件致病菌均无荧光信号,血液模拟标本中3.9×102cfu/m l的细菌含量可被检出。结论以csp2 J为目的基因建立的血清2型猪链球菌Real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性好、快速,可用于临床感染患者标本的初步筛查。