脑缺血再灌注对海马神经MMP-9表达及ERK信号通路的影响

目的研究脑缺血诱导的海马神经基质金属蛋白酶(MMP)-9表达变化及其相关分子调节机制。方法①取雄性SD大鼠20只随机分为模型组15只和假手术组5只,模型组采用四动脉阻断法建立前脑缺血模型(再灌注时间分别为6、12、24 h),假手术组手术步骤同上、但不阻断动脉;两组均断头取脑,采用电泳和免疫印迹法检测胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、前酶原(pro)-MMP-9蛋白表达,选择表达最显著的再灌注时间点用于下述实验的模型制备。②取30只SD大鼠随机分为氯胺酮组、U0126组、腹腔溶剂组、脑室溶剂组各5只和假手术组10只,前四组均采用上述方法建立前脑缺血模型,在动脉阻断前30 min氯胺酮组腹腔注射氯胺酮50 mg/kg,U0126组用微量注射器通过单侧脑室注射U0126(0.5μg/2μL),腹腔溶剂组和脑室溶剂组分别经腹腔和脑室注射等量生理盐水,假手术组处理同上,各组处理完毕后均同上检测三种蛋白表达。结果前脑缺血再灌注后p-ERK和pro-MMP-9蛋白水平持续上调(P<0.05),且24 h最高;氯胺酮组p-ERK和pro-MMP-9蛋白水平显著高于腹腔溶剂组(P<0.05),U0126组pro-MMP-9蛋白表达显著高于脑室溶剂组(P<0.05)。结论脑缺血可诱导海马脑区pro-MMP-9基因表达和ERK活性上调,胞内N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体介导的钙信号增强及其激活的ERK级联是其重要机制;此为缺血后脑损伤的临床治疗提供了新的思路。