携带人金属蛋白酶组织抑制剂1重组腺病毒的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的构建携带人金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的重组腺病毒AdV-hTIMP1,感染体外培养的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,观察其mRNA表达情况。方法应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统在大肠埃希菌BJ5183中通过同源重组构建Ad-hTIMP1和对照Ad-Track。阳离子脂质体法将重组腺病毒转染到人胚胎肾细胞(HEK293T)中进行包装和扩增。纯化后PCR鉴定hTIMP1目的基因,OD260法测定滴度,透射电镜观察腺病毒形态。将人脐静脉内皮细胞CRL-1730分为3组,空白对照组、Track对照组和TIMP1实验组,感染48h后收集细胞,半定量PCR(RT-PCR)法检测内皮细胞中TIMP1mRNA的表达情况。结果重组腺病毒Ad-hTIMP1的滴度为1.9×1012v.p/mL。其感染人脐静脉内皮细胞CRL-1730后,实验组TIMP1mR-NA的表达明显升高(P<0.05)。结论成功构建了携带hTIMP1基因的重组腺病毒Ad-hTIMP1,成功感染了体外培养的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,使细胞中hTIMP1过表达,为心血管疾病的基因治疗提供平台。