survivin基因沉默对腺样囊性癌细胞生长和凋亡的影响

目的探讨RNA干扰下调survivin基因表达后腺样囊性癌细胞生物学行为变化及其与caspase-3基因表达的相关性。方法设计、合成小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),构建表达载体pGenesil-shRNA-survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-2细胞株,G418筛选阳性克隆。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测转染后的ACC-2细胞中survivin、caspase-3 mRNA及蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,原位细胞凋亡(TUNEL)法及透射电子显微镜研究细胞凋亡。结果测序证实表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-survivin的ACC-2细胞株中,survivin mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),caspase-3 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05),survivin与caspase-3的mRNA和蛋白表达呈显著负相关(r=-0.333,P<0.05)。ACC-2细胞增殖受到抑制,透射电镜及TUNEL法可见细胞出现凋亡。结论成功构建了survivin基因的RNAi真核表达载体,pGenesil-shRNA-survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞生长。